Contexte Les tests IGRA sont des alternatives intéressantes au test cutané à la tuberculine TST pour la détection de l’infection à Mycobacterium tuberculosis Cependant, l’incapacité à confirmer définitivement la présence de la plupart des infections à M tuberculosis entrave l’évaluation de la précision IGRA. infection tuberculeuse, nous avons cherché à déterminer la sensibilité du TST et des tests IGRA QuantiFERON-TB [QFT] et QuantiFERON-TB Gold [QFT-G] dans des situations où l’infection est confirmée par la récupération de M tuberculosis par cultureMethods Nous mené une étude comparative multicentrique, prospective et multicentrique, dans laquelle des personnes soupçonnées d’être atteintes de tuberculose ont été testées simultanément avec le TCT, le QFT et le QFT-GResults. La tuberculose a été cultivée à partir d’échantillons de% des personnes suspectées de tuberculose; l’induration du TST était de ⩾ mm pour% des sujets% intervalle de confiance [IC],% -% Le QFT indiquait une infection tuberculeuse pour% des sujets% CI,% -% et était indéterminé pour% Le QFT-G a donné des résultats positifs pour % de sujets% CI,% -% et résultats indéterminés pour les sujets% Si les sujets avec des résultats QFT-G indéterminés ont été exclus,% des sujets% IC,% -% ont des résultats positifs au TCT, et le même nombre de sujets a un QFT positif -G résultats L’infection par le VIH était associée à des résultats de TCT faux négatifs mais pas à des résultats de QFT-G faussement négatifs. Conclusions Le TST, QFT et QFT-G présentent une sensibilité similaire chez les personnes ayant une infection confirmée par culture. Les résultats QFT-G ne doivent pas être utilisés pour exclure le diagnostic de tuberculose chez les personnes présentant des signes ou des symptômes évocateurs

Le test tuberculinique TCT a été utilisé pour soutenir le diagnostic de tuberculose tuberculeuse et d’infection latente à Mycobacterium tuberculosis depuis près d’un siècle. Il évalue l’hypersensibilité cellulaire aux antigènes M tuberculosis après injection intradermique de tuberculine PPD, un mélange complexe de protéines dérivées de M tuberculosis. Cependant, des réponses faussement positives au TCT peuvent survenir après un contact avec des mycobactéries environnementales partageant des antigènes communs avec M tuberculosis ou après la vaccination par le BCG de Calmette-Guérin [ ,,] Des résultats TST faussement négatifs peuvent survenir en présence d’une infection par le VIH ou après une vaccination récente avec des vaccins viraux vivants atténués Les erreurs de positionnement et de lecture du TST affectent également la précision. la réactivité immunitaire médiée offre des avantages potentiels et peut éviter certaines limitations du TST in vitro Les efforts se sont concentrés sur l’IFN-γ en tant que cytokine critique pour la défense de l’hôte contre la tuberculose. [, -] Tests de libération d’IFN-γ Les IGRA détectent la libération d’IFN-γ des lymphocytes après incubation avec des antigènes M tuberculosis Le premier IGRA approuvé comme alternative au TST par la Food and Drug Administration des États-Unis était le test QuantiFERON-TB QFT; Cellestis Le dosage mesure la libération d’IFN-γ lorsqu’un échantillon de sang total est stimulé par PPD L’identification et la caractérisation des protéines M tuberculosis, telles que la protéine ESAT et la protéine filtrante CFP-, ont conduit à leur utilisation antigènes dans les IGRA Ces protéines sont des produits d’une région génomique de différence appelée RD, qui est présente chez M tuberculosis et les souches pathogènes de M bovis mais absentes du BCG et de la plupart des mycobactéries NTM non-tuberculeuses qui mesurent ESAT et CFP- la réponse, soit en tant qu’antigènes recombinants soit en mélanges de peptides chevauchants, semble être hautement spécifique [,,,,,, -] Cependant, la sensibilité des IGRA utilisant ces antigènes a varié de% à% [, ,,, -] Parce que les méthodes IGRA , les critères d’interprétation et les populations étudiées varient considérablement selon les rapports publiés, la sensibilité à l’IGRA reste incertaine car ESAT et CFP- stimulent la libération de moins d’IFN-γ que ne le fait le PPD, les TLIG ayant une plus grande sensibilité analytique. e requiredLes objectifs de cette étude étaient d’estimer la sensibilité du TST, du QFT et d’une nouvelle IGRA de sang total qui évalue la réponse à l’ESAT et à la CFP- le test QuantiFERON-TB Gold [QFT-G] Nous avons également recherché des facteurs Les données de cette étude ont été examinées par la Food and Drug Administration des États-Unis avant l’approbation de la QFT-G et par les Centers for Disease Control et de prévention lorsque le QFT-G les lignes directrices ont été préparées

Matériaux et méthodes

Les sujets des villes américaines ont été recrutés pour cette étude après approbation du comité d’examen institutionnel par les institutions participantes. De juin à décembre, les personnes présentant des symptômes, des signes ou des preuves radiographiques de TB ont été sélectionnées pour participer à cette étude. reçu & gt; jours de traitement pour la tuberculose ou l’infection tuberculeuse latente Si des sujets ont été découverts après l’inscription pour avoir reçu un traitement dans l’année précédant l’inscription, leurs informations ont été exclues de l’analyse, mais les informations des sujets traités ont été traitées. L’utilisation d’un questionnaire standardisé a permis de recueillir des données sur l’âge, l’appartenance ethnique, le pays de naissance, la résidence étrangère et la résidence ou le travail dans les établissements de santé, les prisons, les refuges pour sans-abris, les unités de réhabilitation. La prévalence dans le pays de naissance était basée sur des données Les sujets ont été interrogés sur la vaccination antituberculeuse et la vaccination par le BCG. Les sujets nés sans résidence étrangère ont été classés comme «n’ayant pas reçu de vaccination BCG». et les traitements liés à la TB ont été extraits des dossiers médicaux Les sujets ont été classés dans la catégorie «tuberculose confirmée par culture» si M tuberculose a été récupérée à partir de ⩾ culture; «Tuberculose à culture négative» si les résultats cliniques étaient compatibles avec la TB, le traitement de la tuberculose a entraîné une amélioration, et aucune culture n’était positive pour M tuberculose après des mois d’observation; ou «pas de TB» s’ils ne répondaient pas aux critères de collecte d’échantillons TBBlood confirmés par culture ou négatifs à la culture et IGRA Des échantillons sanguins de TLIG ont été prélevés avant la réalisation du TCT L’incubation d’échantillons sanguins avec des antigènes test a été initiée après la collecte. ; équivalents à des gouttes, une solution saline ou de la phytohémagglutinine ont été ajoutés simultanément à des aliquotes -mL d’échantillons de sang héparinisés dans des plaques de microtitration Costar -well; Saline, phytohémagglutinine, M tuberculosis PPD et Mycobacterium avium PPD provenaient de kits QFT; des peptides chevauchants représentant ESAT ou CFP- avec des séquences décrites précédemment ont été fabriqués par Schafer-N ou Jerini Peptide Technologies, se sont révélés être purs à pg par chromatographie liquide à haute performance, et ont été mélangés dans un pH de solution saline tamponnée au phosphate pendant concentration finale de μg / mL pour chaque peptide. Les plaques ont été incubées pendant – h à ° C, et le plasma a été récolté. Une période d’incubation plus longue – h a été autorisée mais a été considérée comme une déviation du protocole La concentration d’IFN-γ en μL de chaque plasma l’échantillon a été déterminé par ELISA Fresh, réfrigéré jusqu’à jours, ou des échantillons de plasma décongelé après stockage à-° C ont été testés. Pour le QFT, les réactifs ELISA et les instructions fournis avec des kits QFT ont été utilisés. Utilisation d’une laveuse de microplaques Dynex Technologies Dynex Les densités optiques ont été mesurées à l’aide d’un lecteur de microplaques Dynex avec le logiciel Revelation, version Dynex Technologies Les densités optiques ont été importées dans des dosages spéci logiciel fic QFT-TB CDC, version; Cellestis qui convertit les densités optiques en UI d’IFN-γ sur la base des standards IFN-γ de,, et IU / mL mesurés en double dans chaque test ELISA QFT ont été interprétés comme spécifié dans le tableau

Tableau View largeTélécharger les lamesInterprétation critères pour le test QuantiFERON-TB chez les personnes suspectées d’avoir tuberculosisTable View largeTélécharger slideInterprétation critères pour le test QuantiFERON-TB chez les personnes soupçonnées d’avoir la tuberculosePour le QFT-G, les concentrations d’IFN-γ en μL de plasma stimulé avec du sérum physiologique , ESAT-, CFP-, ou phytohémagglutinine ont été déterminées en utilisant des réactifs ELISA fournis dans des kits prototypes de kits QuantiFERON-CMI pour QFT-G qui ne comprenaient pas d’antigènes Le test ELISA QuantiFERON-CMI est plus sensible que la limite de détection EFTA QFT IFN-γ vs UI / mL d’IFN-γ Les plaques ELISA QuantiFERON-CMI ont été lavées et lues avec les mêmes instruments et réglages que ceux utilisés pour l’ELISA QFT, à l’exception des standards IFN-γ allant de IU / mL à IU / mL. inclus sur chaque planche en double; la période d’incubation ELISA initiale a été étendue à h; et les densités optiques ont été importées dans un logiciel spécifique au test QFT-CMI CDC, version; Cellestis et convertis en UI des résultats IFN-γ QFT-G ont été interprétés comme indiqué dans le tableau

Critères d’interopérabilité du QuantiFERON-TB Gold assayTST Patients formés injectés mL TU Tubersol Connaught Laboratories par la méthode Mantoux Le personnel a été invité à mesurer la réponse TST – h après le placement TST mesure obtenue & lt; h ou & gt; h après le placement a été considéré comme un écart de protocole TST réactions ⩾ mm ont été interprétés comme positifs, et les réactions & lt; Les analyses statistiques ont été effectuées à l’aide de SPSS, la version SPSS Sensitivity a été estimée en divisant le nombre de résultats d’essais positifs par le nombre de sujets ayant une tuberculose confirmée par culture ou, si spécifié, par le nombre de ces sujets avec des résultats valides Les analyses logivo-régressives multivariées et bivariées ont été utilisées pour identifier les facteurs associés aux résultats négatifs du TCT et du QFT-G chez les sujets tuberculeux confirmés par culture. La colinéarité a été évaluée à l’aide de diagnostics de régression. Les OR ont été ajustés pour la confusion en utilisant une régression logistique rétrograde pas à pas et pour les variables qui, dans l’analyse bivariée, ont été associés à un résultat de test positif avec P & lt; P & lt; a été considéré comme statistiquement significatif

Résultats

Parmi les personnes sélectionnées pour cette étude, étaient éligibles, et% de sujets éligibles ont consenti à participer à l’étude Les données des sujets ont été exclues de l’analyse pour les raisons énumérées dans la figure Les caractéristiques des sujets inclus dans l’analyse sont présentées dans le tableau Soixante-neuf les sujets avaient une tuberculose confirmée par la culture, la maladie se limitant aux sites pleuraux ou extrapulmonaires chez les sujets; les sujets avaient une tuberculose à culture négative Les sujets restants étaient considérés comme n’ayant pas la tuberculose après des mois d’observation

Figure View largeTélécharger la population étudiante, y compris les personnes soupçonnées d’avoir la tuberculose TB TCT, test cutané à la tuberculine aLe test QuantiFERON-TB Gold QFT-G n’a pas été complété en raison d’une défaillance de l’incubateur, de quantités insuffisantes de sang et d’accidents de laboratoire. suspicion de tuberculose TB TCT, test cutané à la tuberculine aL’analyse QuantiFERON-TB Gold QFT-G n’a pas été complétée en raison d’une défaillance de l’incubateur, de quantités insuffisantes de sang et d’accidents de laboratoire

Caractéristiques de sujets suspects de tuberculose TBLes écarts de protocole viraux ont été observés chez les sujets, et ces écarts n’ont pas conduit à l’exclusion. Traitement survenu des années avant l’inscription chez les sujets. Sujet TB ou sujets latents d’infection tuberculeuse Les mesures TST ont été lues – h après placement pour les sujets et h après placement pour le sujet Les échantillons sanguins ont été incubés pendant – h dépassant le h recommandé pour les sujets Les sujets qui ont subi des déviations mineures du protocole n’étaient statistiquement pas différents aucun écart en ce qui concerne l’âge, l’origine ethnique, le diagnostic final, le statut sérologique, les résultats du TST et les résultats des résultats QFT-G non montrés Les résultats du QFT-G et du TST sont stratifiés par diagnostic final. pour% des sujets% IC,% -% avec culture-co tuberculose confirmée; il n’y avait pas de différence significative dans le pourcentage de résultats positifs entre les patients atteints de maladie pulmonaire et extrapulmonaire% vs%; Les résultats P = QFT-G étaient positifs pour% de sujets IC%,% -% avec TB confirmée par culture et indéterminée pour les sujets%; il n’y avait pas de différence significative dans le pourcentage de résultats positifs entre les personnes atteintes de maladie pulmonaire et extrapulmonaire% vs%; P = L’induration de TST était & gt; Si les résultats étaient QFT-G indéterminés Si les résultats QFT-G indéterminés étaient exclus,% des sujets IC%,% -% avaient des résultats positifs au TCT et le même nombre de sujets avaient des résultats QFT-G positifs. -G et TST résultats convenus pour les sujets%, avec les deux tests donnant des résultats négatifs pour les sujets%

Tableau View largeTélécharger slideTuberculin test cutané Test TST et QuantiFERON-TB Gold Résultats QFT-G, stratifiés par diagnostic finalTable View largeDownload slideTuberculin test cutané Test TST et QuantiFERON-TB Gold Résultats QFT-G, stratifiés par diagnostic final

Résultats de TST par rapport au test QuantiFERON-TB Gold Résultats QFT-G pour les sujets atteints de tuberculose tuberculeuse confirmée par culture, les sujets atteints de TB culture négative et les sujets sans tuberculoseTable View largeTélécharger slideTuberculin test cutané Résultats TST versus QuantiFERON-TB Résultats de l’essai QFT-G pour les sujets tuberculeux tuberculeux confirmés par culture, sujets atteints de tuberculose culture-négative et sujets sans tuberculoseDans l’analyse bivariée, l’infection par le VIH, l’âge, l’origine ethnique blanche non hispanique et la perte de poids involontaire Résultats pour les sujets ayant une tuberculose confirmée par culture Après ajustement pour la confusion, seule l’infection par le VIH et l’âge restaient significativement associés aux résultats TST faux négatifs L’ethnicité blanche non hispanique était le seul facteur significativement associé au tableau de résultats QFT-G faussement négatif. l’infection était fortement associée à des résultats de TST faussement négatifs P =, il ne semblait pas ect QFT-G résultats P = L’induration du TST était de ⩾ mm pour% de% IC,% -% de sujets infectés par le VIH avec TB confirmée par culture; le résultat QFT-G était indéterminé pour% de ces sujets et positif pour% de% IC,% -% de ceux avec des résultats interprétables

Table View largeDownload slideAssociation des caractéristiques des sujets sélectionnés avec le test cutané à la tuberculine faussement négatif TST resultsTable Voir grandDownload slideAssociation des caractéristiques du sujet sélectionné avec les tests TST tuberculiniques faussement négatifs

Table View largeTélécharger slideAssociation d’ethnicité avec test QuantiFERON-TB Gold faussement négatif QFT-G resultsTable Voir grandTélécharger slideAssociation d’ethnicité avec test QuantiFERON-TB Gold faussement négatif Résultats QFT-GLes résultats QFT-G étaient indéterminés pour% des sujets avec culture- tuberculose confirmée et pour% des sujets atteints de tuberculose culture négative P = QFT-G résultats indéterminés pour les autres séronégatifs Neuf des sujets ayant des résultats QFT-G indéterminés présentaient de faibles réponses mitogènes et des concentrations élevées nulles, à savoir la concentration en IFN-γ Aucune des réponses étudiées n’était associée à des résultats QFT-G indéterminés dans l’ensemble de la cohorte ou à des sujets ayant un TBNTM confirmé par culture chez des sujets, Aucun d’entre eux avait TB Pour les sujets, les espèces non tuberculeuses récupérées étaient connus pour avoir des gènes qui codent ESAT et CFP – Mycobacterium kansasii wa s récupérés chez les sujets, et les résultats de TST étaient positifs pour ces sujets; Les résultats QFT-G étaient négatifs pour ces sujets et indéterminé pour le sujet Mycobacterium szulgai a été retrouvé chez le sujet qui avait des résultats négatifs au TCT et négatifs QFT-G Aucun de ces sujets n’avait d’infection par le VIH Mycobacterium avium-intracellulare a été retrouvé chez des sujets dont résultats positifs du TCT et du QFT-G; le résultat du TCT seul était positif pour ces sujets, et le résultat QFT-G seul était positif pour ces sujets. D’autres MNT ont été récupérées chez des sujets dont le TB-QTG et le TCT étaient positifs pour la TB; le sujet avait seulement un résultat positif au TCT et n’avait qu’un résultat QFT-G positif. Le QFT montrait une réactivité au M avium chez les sujets chez lesquels M avium-intracellulare était récupéré, chez des sujets chez lesquels d’autres NTM avaient été récupérés et chez aucun sujet tuberculose confirmée Les résultats QFT étaient positifs pour l’infection à M tuberculosis chez% des sujets% IC,% -% avec TB confirmée en culture et résultats valides QFT Sept sujets% avaient des résultats QFT indéterminés

Discussion

Dans la présente étude, un diagnostic de tuberculose à culture négative a été posé pour des sujets dont la santé s’est améliorée avec un traitement antituberculeux. Parmi ceux-ci,% des sujets ont eu des résultats positifs au TCT et% ont eu des résultats positifs. Résultats QFT-G Bien que non diagnostiqué, un résultat positif au TCT a probablement influencé la décision du clinicien de traiter la tuberculose. Ainsi, les résultats du TCT peuvent avoir indirectement contribué au diagnostic. Ceci explique peut-être pourquoi une plus grande proportion de sujets tuberculeux La tuberculose confirmée par culture a eu des résultats positifs au TCT Un nombre important de sujets non tuberculeux ont eu des résultats positifs au TCT ou au QFT-G Ceci était attendu car la majorité des sujets présentaient un risque important d’être infecté par M tuberculosis. avec M tuberculosis ne peut pas être exclu Parce que les gènes ESAT et CFP- se trouvent dans M kansasii et M szulgai, des résultats positifs QFT-G peuvent être attendus chez les personnes dont Ces organismes ont été récupérés Cependant, les sujets répondaient aux critères publiés pour la maladie attribuable à ces organismes , et aucun d’entre eux n’avait de résultats QFT-G positifs. La comparaison directe de nos résultats avec ceux des rapports antérieurs est compliquée par des différences d’interprétation. La mesure de la sensibilité QFT-G dans une population hétérogène est inférieure à la sensibilité exprimée par Mori et al parmi un groupe de sujets japonais. Les deux études ont utilisé des méthodes de test similaires et ont mesuré la sensibilité chez les personnes non confirmées. Cependant, les critères d’interprétation différaient. Dans les deux études, une réponse ESAT ou CFP de IU / mL d’IFN-γ a été utilisée comme seuil pour séparer les réponses positives et négatives, mais notre évaluation incluait: une règle de fond, qui a été introduite au cours du processus d’approbation de la Food and Drug Administration des États-Unis. Cette règle stipule que, pour des résultats positifs, outre une réponse IFN-γ ⩾ UI / mL, ESAT ou CFP- doit être supérieure de% à la concentration d’IFN-γ dans le plasma néant stimulé par la solution saline Trois% de nos résultats indéterminés auraient été interprétés comme positifs ou négatifs sans cette règle. et al ont utilisé des méthodes et des critères d’interprétation similaires à ceux utilisés par Mori et al , mais ils ont trouvé une sensibilité QFT-G légèrement inférieure à% Ferrara et al utilisant une règle de fond différente, excluant les résultats Concentration d’IFN-γ & gt; IU / mL dans le plasma stimulé par la solution saline de l’analyse Ils ont rapporté que% des sujets avec TB confirmée par culture avaient des résultats QFT-G positifs. En utilisant des ESAT et CFP recombinants, Ravn et al ont rapporté que% des sujets la TB confirmée a répondu à l’ESAT ou à la CFP recombinante en produisant une concentration d’IFN-γ supérieure d’au moins IU / mL à celle mesurée dans le plasma stimulé par la solution saline. La fréquence des résultats indéterminés QFT-G varie considérablement d’une étude à l’autre. Cela peut être dû à des différences dans les critères d’interprétation, la performance des tests locaux et les populations étudiées. Les résultats QFT-G étaient indéterminés pour% de la cohorte de notre étude. Aucun facteur lié au sujet ou au test n’a été associé à des résultats indéterminés. ont été liés à l’immunosuppression et au faible nombre de lymphocytes T CD chez les personnes infectées par le VIH [,,] Notre étude a inclus peu de sujets présentant une immunosuppression manifeste. L’infection par le VIH a été documentée en% de notre sujet. L’observation selon laquelle les résultats indéterminés présentaient à la fois des concentrations élevées nulles et des réponses mitogenes faibles suggère une transposition des valeurs, et les résultats indéterminés étaient probablement liés à la technique. Cette étude a des limites Restreindre les analyses aux seules personnes La tuberculose confirmée par la culture garantit que les résultats de tests négatifs sont faussement négatifs, mais cela peut ne pas refléter correctement la sensibilité au test de l’infection tuberculeuse latente M ou de la tuberculose culture-négative. La sévérité de la maladie peut inhiber les réponses immunitaires. Quelques écarts de protocole ont été introduits. Quelques TST ont été lus tôt le deuxième jour ou tard le troisième jour après le placement, à des heures qui convenaient au sujet. De plus, la petite taille de l’échantillon a pu avoir un impact sur le nombre de tests. la précision de nos estimations, en particulier les mesures liées aux infections par le VIH En résumé, nous avons trouvé que le TST, QFT et QFT-G ont des sensibilités similaires pour détecter l’infection à M tuberculosis chez les personnes ayant une tuberculose confirmée par culture. Avec des sensibilités similaires, les caractéristiques méthodologiques et logistiques du QFT-G peuvent entraîner son utilisation. du TCT Bien que tous ces tests puissent aider au diagnostic de l’infection à M tuberculosis, leur sensibilité est insuffisante pour exclure le diagnostic de la tuberculose chez les sujets présentant des signes ou des symptômes évocateurs

Remerciements

Nous remercions les bénévoles qui ont participé à cette étude; Jim Rothel, Chris Kozik, Cindy Merrifield, Gloria Stevens, Gerry Drewyer, Claire Murphy, Tarek Elbeik, Wei Lu, Brenda Robles et Jenny Van Herpen, pour l’assistance administrative et de laboratoire; Nong Shang, pour des conseils statistiques; et Kenneth Castro et Andrew Vernon, pour l’assistance éditoriale. Les centres de contrôle et de prévention des maladies Préparation de manuscrits Cellestis a fourni une assistance technique, des trousses QFT-CMI et des antigènes, et un soutien pour certains tests ELISA Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: aucun conflit |

Dans la littérature