Contexte Tests rapides de dépistage de la syphilis au point de service basés sur la détection simultanée d’anticorps tréponémiques et non tréponémiques Les tests POC doubles offrent la possibilité d’augmenter la couverture du dépistage et du traitement de la syphilis Cette étude visait à réaliser une évaluation multisite des performances d’un test de syphilis double POC dans ChinaMethods Les participants ont été recrutés parmi des patients dans des cliniques d’infection sexuellement transmissibles et des groupes à haut risque dans des sites de proximité en Chine. Trois types de prélèvements: sang total [BH], sang prélevé au doigt [BF] et plasma sanguin [BP] ont été utilisés pour évaluer la sensibilité. Spécificité de la plate-forme double voie DPP Syphilis Screen et Confirm test en utilisant ses lignées tréponémiques et non tréponémiques pour comparer le test TPPA d’agglutination des particules de Treponema pallidum et le test de sérum non chauffé rouge toluidine TRUST comme standards de référence Résultats Un total de spécimens WB, FB et BP d’individus a été collecté Les sensibilités par rapport à TPPA étaient% pour WB,% pour F B, et% pour BP, et les spécificités étaient%,% et%, respectivement. Les sensibilités par rapport à TRUST étaient% pour WB,% pour FB et% pour BP, et les spécificités étaient%,% et%, Pour les échantillons ayant un titre TRUST de: ou supérieur, les sensibilités étaient% pour WB,% pour FB et% pour BPConclusions. Le test DPP montre une bonne sensibilité et spécificité dans la détection des anticorps tréponémiques et non tréponémiques dans les types de spécimens. peut être considéré comme une alternative dans le diagnostic de la syphilis, en particulier dans les zones à ressources limitées

Le syphilis est une maladie infectieuse chronique causée par le spirochète Treponema pallidum La syphilis est généralement transmise par contact sexuel ou de la mère au fœtus ou au nouveau-né L’Organisation mondiale de la santé L’OMS estime que des millions de nouveaux cas de syphilis Traditionnellement, le diagnostic en laboratoire de la syphilis est basé sur une séquence de dépistage du sérum avec un test non tréponémique tel que le dosage rapide du plasma, le test de sérum tolérant non chauffé au rouge TRUST ou la maladie vénérienne. Essai de laboratoire, suivi d’un test de confirmation spécifique au tréponème tel que le test TPPA d’agglutination des particules T pallidum, le test d’absorption des anticorps tréponémiques fluorescents ou le dosage immunoenzymatique Cependant, les besoins en équipements et personnel, tels que réfrigération pour le stockage des réactifs, sérum de séparation, rotateur électrique pour le test de floculation de fonctionnement, et exp Le personnel de laboratoire expérimenté pour mener et interpréter les tests est souvent un obstacle à la réalisation des tests dans les pays à faible revenu. En outre, le temps requis pour rapporter les résultats des tests est une autre préoccupation, entraînant généralement un retard dans le diagnostic de l’infection. et, par conséquent, occasion manquée pour le traitement et les interventions, y compris la notification du partenaire. Ces dernières années, un certain nombre de tests tréponémiques rapides simples sur le lieu de soins sont devenus disponibles sur le marché et des résultats encourageants sur certains tests. Ces tests ont été adoptés avec succès par de nombreux pays dans leurs programmes de dépistage prénatal visant à détecter la syphilis pendant la grossesse et à en prévenir les effets indésirables . Cependant, les tests POC actuels pour détecter les anticorps tréponémiques sont incapables de différencier entre l’infection actuellement active et historiquement infectée ou traitée parce que cet anticorps spécifique tréponémique peut rester détectable à vie , ce qui limite l’application de ces tests pour guider le traitement chez les personnes des groupes à haut risque, qui ont généralement une exposition à vie prolongée à la syphilis. Test POC double POC pour la détection simultanée des anticorps reagin et tréponémiques DPP Syphilis Screen & amp; Confirm a été développé et évalué avec des échantillons de sérum archivés dans un laboratoire aux États-Unis, indiquant les résultats encourageants L’objectif principal de cette étude était d’évaluer, dans plusieurs sites en Chine, la performance du DPP Syphilis Screen & amp; Confirmer le test dans les types d’échantillons en utilisant le test TPPA et TRUST comme standards de référence

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

Sites d’étude et population

Basé sur plusieurs paramètres, y compris l’engagement local à l’étude, la collecte de suffisamment d’échantillons pour l’évaluation et la maîtrise du contrôle qualité, un total de sites d’étude en Chine Nanchang, Nanjing, Guangzhou, Jiangmen, Chengdu et Yinchun Cette étude prospective évaluait la sensibilité et la spécificité d’un test évalué. Le recrutement des participants éligibles a eu lieu entre juin et septembre. Tous les patients participant aux cliniques et sujets dans des lieux de travail tels que les lieux de travail du sexe et les bars gays ont été évalués. Les critères d’exclusion de l’étude comprenaient l’utilisation d’antibiotiques au cours de la semaine dernière, l’âge et l’âge; Les sujets jugés à risque plus élevé de syphilis ont été suréchantillonnés Après avoir obtenu un consentement verbal éclairé, les participants ont reçu un code unique leur permettant de participer anonymement. les caractéristiques démographiques et comportementales ont été recueillies à l’aide d’un questionnaire structuré

Test d’évaluation

Le test d’évaluation est le Dual Path Platform DPP Syphilis Screen & amp; Le test est basé sur la technologie DPP brevetée de Chembio. Le DPP incorpore un dispositif immunochromatographique contenant des bandes de membrane de nitrocellulose perpendiculaires entre elles dans une formation en T. Détails sur le principe de la double technologie de DPP de Chembio. Le test POC a été décrit ailleurs L’évaluation de la ligne tréponémique T a été réalisée en utilisant la positivité T identifiée à l’oeil nu pour comparer avec celle de TPPA tandis que l’évaluation de la ligne non tréponémique T a été réalisée en utilisant la positivité lecteur oculaire ou automatique à une valeur limite de ≥, qui a été proposé par le fabricant, pour comparer avec les résultats de TRUST

Procédures de prélèvement et d’analyse des échantillons

Sur la base de la sensibilité et de la spécificité attendues de% , où une précision de% a été utilisée, et la prévalence TPPA et TRUST estimée de% dans la population étudiée, un échantillon d’au moins des sujets permettrait une estimation raisonnable de l’ensemble sensibilité et spécificité dans notre étude Presque tous les sujets qui ont été invités à participer à l’étude ont fourni des échantillons de sang veineux, mais% d’entre eux dans des milieux cliniques et% dans des établissements de proximité ont accepté de fournir également du sang prélevé par piqûre. selon les pratiques normales; lors du prélèvement de sang, la première goutte de sang a été essuyée après avoir piqué le doigt et la seconde goutte a été prélevée. Les procédures de test étaient basées sur les instructions du fabricant pour les prélèvements de sang total et de ponction veineuse. la deuxième goutte de sang de doigt avec une boucle d’échantillon jetable ou une pipette de laboratoire -μL, transféré le sang de la boucle ou la pipette dans le centre du puits de l’appareil, ajouté des gouttes de tampon de fonctionnement à bien, ajouté des gouttes de tampon bien après quelques minutes, et lire le résultat du test après – minutes Pour les échantillons de sang total ou de plasma veineux, nous avons directement ajouté μL d’échantillon dans le puits, suivi des mêmes procédures que pour les échantillons de sang prélevés ci-dessus. à partir de l’ajout du tampon d’exécution, le test a été considéré comme invalide. Une ligne dans la zone de contrôle sans lignes dans les zones d’essai T ou T était inter prétérit pour les anticorps tréponémiques ou non tréponémiques Une ligne dans la zone témoin avec une ligne dans les zones T et / ou T a été interprétée comme positive pour les anticorps tréponémiques et / ou non tréponémiques. Le technicien de laboratoire qui a effectué le test et a lu les résultats des tests a été aveuglé aux résultats déterminés par d’autres dosages ou basés sur d’autres spécimens

L’analyse des données

La sensibilité et la spécificité du test POC double et de leurs intervalles de confiance en pourcentage ont été calculées en comparant T à l’œil nu, et T à l’œil nu et au lecteur automatique, respectivement, par rapport aux normes de référence suivantes: TPPA Fujirebio Inc, Tokyo, Japon sur plasma pour l’évaluation de T; CONFIANCE Rongsheng Biotech Co, Ltd, Shanghai, Chine sur le plasma pour T; et une combinaison de TPTP positif et titre de TRUST à titre élevé ≥: pour T Compte tenu de l’impératif clinique et de santé publique d’identifier et de traiter autant de cas que possible de syphilis active, un titre TRUST de ≥: plutôt que ≥: a été utilisé pour évaluer la sensibilité du test POC Afin de déterminer si le lecteur automatique pouvait améliorer les performances de T, la sensibilité et la spécificité déterminées par le lecteur ont été comparées à celles déterminées à l’œil nu. Le test de McNemar a été appliqué pour comparer les différences de sensibilités. La performance globale de T et T dans le test POC double par rapport à TPPA et TRUST, respectivement, a été évaluée avec l’utilisation d’analyses ROC de caractéristiques de fonctionnement du récepteur selon des procédures standard Basé sur l’analyse ROC , la meilleure valeur seuil a été utilisée pour estimer la sensibilité et la spécificité de T et les comparer avec celles déterminées à un seuil aleur de ≥, qui a été proposé par le fabricantAnalyses ont été réalisées avec le logiciel SPSS version SPSS Inc, Chicago, Illinois et version du logiciel MedCalc MedCalc Software, Mariakerke, Belgique L’étude a été revue et approuvée par le Comité d’éthique médicale de l’Académie chinoise de Institut de dermatologie des sciences médicales et Centre national de lutte contre les maladies sexuellement transmissibles à Nanjing

RÉSULTATS

Population étudiée et spécimens

Au total, les individus% hommes et% femmes ont été inclus dans l’étude. L’âge moyen était les années SD, années; En ce qui concerne la répartition géographique,% de Chengdu,% de Guangzhou,% de Jiangmen,% de Nanchang,% de Nanjing et% de Yinchun Environ% n = de patients ont été recrutés dans les cliniques et un autre% n = de le milieu de la sensibilisation Cent quarante-huit% des femmes ont déclaré avoir eu des rapports sexuels commerciaux alors que% des hommes ont admis avoir des comportements homosexuels. Parmi les participants, des échantillons de sang de plasma, de sang total veineux et de

Performance du test de double POC

Parmi les échantillons de plasma testés,% étaient réactifs dans les tests TRUST et TPPA, tandis que% étaient réactifs dans le test TPPA seul et% dans le test TRUST seul. Les% restants étaient non réactifs dans les tests TRUST et TPPA Une comparaison de la T et les résultats T ont déterminé que dans le test POC double avec les résultats TPPA et TRUST, les sensibilités globales étaient% IC,% -% pour le plasma,% IC%,% -% pour le sang total veineux et% IC,% -% pour le sang prélevé au doigt pour la détection d’anticorps tréponémiques; leurs spécificités correspondantes étaient%% CI,% -%,%% CI,% -%, et%% CI,% -% Basé sur les comparaisons de T dans le test POC double avec TRUST, les sensibilités et spécificités globales étaient%% CI,% -% et%% CI,% -%, respectivement, pour le plasma; %% IC,% -% et%% CI,% -%, respectivement, pour le sang total veineux; et%% CI,% -% et%% CI,% -%, respectivement, pour le sang prélevé par piqûre au doigt Les types de spécimens avaient des sensibilités et des spécificités similaires pour détecter les anticorps tréponémiques et non tréponémiques, sauf que la sensibilité du sang prélevé au doigt pour détecter les anticorps non tréponémiques était inférieure à que dans le plasma ou les échantillons de sang total veineux dans les paramètres cliniques

Sensibilité de table et spécificité de la voie tréponémique DPP par rapport au test d’agglutination des particules de Treponema pallidum et de la lignée DPP non tréponémique par rapport au test de sérum rouge non chauffé à la toluidine Déterminé par l’oeil nu Taille de l’échantillon DPP T DPP T Sensibilité%% CI P Valuea Spécificité%% IC P Valuea Sensibilité%% IC P Valuea Spécificité%% CI P Clinique de Valuea Sang total – – – – Fingerprick – – – – Plasma – … – .. intoxication. – … – … Sang total non clinique – – – – Fingerprick – – – – Plasma – … – … – … – … Total du sang total – – – – Fingerprick – – – – Plasma – … – … – … – … Réglage par échantillon Taille de l’échantillon DPP T DPP T Sensibilité%% IC P Valuea Spécificité% % CI P Valuea Sensibilité%% IC P Valuea Spécificité%% CI P Clinique de Valuea Sang total – – – – Sonde de doigt – – – – Plasma – … – … – … – … Sang total non clinique – – – – Fingerprick – – – – Plasma – … – … – … – … Total du sang total – – – – Fingerprick – – – – Plasma – … – … – … – … Abréviations: CI, intervalle de confiance; DPP, plate-forme à double trajet; T, ligne tréponémique; T, non linéaires linéaires Comparaison avec des résultats d’échantillons de plasmaVoir de grands échantillons de TPPA positif et un titre TRUST ≥: les sensibilités globales de T pour détecter les anticorps non tréponémiques ont augmenté à% pour le plasma,% pour le sang veineux et% pour le sang et variait de% à% dans les spécimens prélevés dans les cliniques et% dans les milieux non cliniques. Les sensibilités parmi les spécimens ayant un titre TRUST supérieur ≥: étaient significativement plus élevés que ceux avec un titre inférieur ≤: pour tous les types de spécimens P ≤; Tableau En utilisant la combinaison des résultats T / T c.-à-d., La capacité de la DPP à détecter les anticorps tréponémiques et non tréponémiques contre la combinaison TPIT / titrage élevé dans le sang total veineux, la sensibilité de T / T était%% CI,% -% et spécificité était%% CI,% -% Les sensibilités de T n’étaient pas améliorées en utilisant les lecteurs automatiques par rapport à l’oeil nu P & gt; lorsque la valeur de coupure a été définie sur T ≥ ou ≥ Table

Sensibilité de la table de la voie non tréponémique par rapport au test de sérum rouge non chauffé à la toluidine TRUST de TRUST Titre déterminé par l’exposition à l’oeil nu Titre de confiance TRUST ≤: a Valeur TRUST ≥: P Valuec Taille de l’échantillon Sensibilité% P Valeurb Taille de l’échantillon Sensibilité% P Valeurb Clinique Sang total & lt; Fingerprick & lt; Plasma … … & lt; Sang total nonclinique & lt; Fingerprick & lt; Plasma … … Total du sang total & lt; Fingerprick & lt; Plasma … … & lt; Réglage par spécimen Taux de confiance ≤: a Valeur de confiance ≥: P Valuec Taille de l’échantillon Sensibilité% P Valeurb Taille de l’échantillon Sensibilité% P Valueb Clinic Sang total & lt; Fingerprick & lt; Plasma … … & lt; Sang total nonclinique & lt; Fingerprick & lt; Plasma … … Total du sang total & lt; Fingerprick & lt; Plasma … … & lt; Abréviation: TRUST, test de sérum rouge non chauffé à la toluidine Excluant ceux négatifs pour TRUSTb Comparaison avec les résultats de spécimens de plasmac Comparaison entre TRUST titerView Large

Tableau Comparaison de la sensibilité de la ligne non trachéale Ligne non tréponémique avec sang total entre résultats déterminés à l’œil nu et lecteur automatique Méthode de lecture Sensibilité Spécificité Taille de l’échantillon% P Valuea P Valeurb Taille de l’échantillon% P Valuea P Valeurb Œil nu … … … … Critère de lecture T ≥ … … Critère T ≥ & lt; Méthode de lecture Sensibilité Spécificité Taille de l’échantillon% P Valuea P Valeurb Taille de l’échantillon% P Valuea P Valeurb Œil nu … … … … Critère de lecture T ≥ … … Critère T ≥ & lt; Abréviation: T, linéaires non tréponémiques Comparaison avec les résultats déterminés à l’œil nu Comparaison entre les critères T ≥ et T ≥ View LargeBasée sur la courbe ROC, l’aire maximale sous la courbe a été obtenue à T ≥ sensibilité% et spécificité%; Figure et T ≥ sensibilité% et spécificité%; Figure

Figure Vue largeDownload slideReceiver analyse des caractéristiques de fonctionnement pour les échantillons de sang total veineux positif et négatif pour agglutination Treponema pallidum particule TPPA analyse montre le tracé de la ligne tréponémique Dual Path Platform par rapport au test TPPA Le point de coupure de ou plus a été jugé préférable de classer la positivitéFigure View largeTélécharger la diapositive Analyse des caractéristiques fonctionnelles du receveur pour les échantillons de sang total veineux positifs et négatifs pour l’agglutination des particules de Treponema pallidum Le test TPPA montre le tracé de la lignée tréponémique Dual Path par rapport au test TPPA Le point de coupure de ou supérieur a été le meilleur pour classifier la positivité

Figure Vue largeDownload slideReceiver analyse des caractéristiques de fonctionnement des échantillons de sang total veineux positif et négatif pour le sérum rouge toluidine test TRUST montre le tracé de la ligne non tréponémique Dual Path Platform par rapport à TRUST Le point de coupure de ou supérieur a été trouvé pour classifier la positivitéFigure View largeTélécharger slideReceiver analyse des caractéristiques opératoires pour les échantillons de sang total veineux positif et négatif pour le sérum rouge toluidine test TRUST montre le tracé de la ligne non tréponémique Dual Path Platform par rapport à TRUST Le point de coupure de ou supérieur a été trouvé le mieux pour classer la positivité

DISCUSSION

Cependant, les seuls tests sérologiques POC disponibles sur le marché pour la syphilis détectent les anticorps tréponémiques, ce qui limite leur utilisation pour l’interprétation de l’état de la maladie. pour le traitement et les interventions, parce qu’ils ne peuvent pas distinguer entre l’infection active et passée ou traitée même s’ils ont une bonne performance par rapport au TPPA Utilisation continue de ces tests, en particulier dans les populations à forte prévalence de la syphilis Les hommes qui ont des relations sexuelles avec des hommes risquent de recevoir des traitements et des conseils répétés ou d’être fréquemment exclus du diagnostic de syphilis lorsqu’ils sont testés plus tard avec un test non tréponémique. Ces problèmes entraînent souvent une méfiance entre les fournisseurs de tests et les populations cibles. En revanche, l’utilisation du test POC double pourrait donner une indication immédiate de la nécessité du traitement, À notre connaissance, il s’agit de la première étude d’évaluation sur la performance d’un test de POC double utilisant simultanément des types de spécimens en milieu clinique et non clinique. Le test évalué dans la présente étude a donné de bons résultats dans les essais cliniques. les termes de sensibilité et de spécificité par rapport aux tests standards TPPA et TRUST de référence, en particulier parmi les spécimens ayant un titre TRUST de ≥: sensibilité>% en comparaison avec la combinaison TPIT / titre à haute confiance, qui peut être considéré comme le Les résultats combinés T / T révèlent une excellente sensibilité. Il est intéressant de noter que la performance du test dans les contextes de proximité était aussi bonne que dans les milieux cliniques et que la performance n’était pas différente entre les types de spécimens quand il était utilisé. utilisé dans les milieux de sensibilisation Le fait que le test peut être effectué à un niveau élevé sur le site avec différents types de spécimens, en clinique et nonclini c Par le personnel clinique ou les membres de l’équipe de proximité, cela signifie qu’il peut être utilisé dans les cliniques et les services de proximité pour les groupes à haut risque. Sa plus grande valeur sera probablement d’augmenter la couverture des cas de syphilis et la proportion de cas traités, en particulier dans les communautés mobiles et difficiles à atteindre telles que les travailleuses du sexe et les hommes ayant des rapports sexuels avec des hommes, chez qui les taux de retour sont faibles . Le test TRUST a été utilisé comme test non tréponémique de référence pour cette évaluation. Ce test est couramment utilisé dans la pratique clinique dans les zones d’étude. Il existe un bon accord qualitatif et quantitatif entre TRUST et le test rapide de plasma reagin, largement utilisé dans d’autres domaines Outre la lecture visuelle des résultats, un lecteur automatique a été utilisé pour mesurer la densité des lignes d’essai et fournir objectivement soit les résultats quantitatifs ou les résultats qualitatifs en établissant un critère de coupure Comme la performance de T tréponémique Les résultats d’ody à l’œil nu étaient parfaits, nous n’avons pas évalué la sensibilité et la spécificité de T identifiées par le lecteur automatique et comparons les résultats avec ceux identifiés à l’œil nu. Une étude précédente indique que le lecteur semble légèrement plus sensible que visuel lecture, mais nos données n’ont montré aucune amélioration de la performance du test lorsque le lecteur a été utilisé Cependant, comme indiqué dans les résultats des analyses ROC, il y a une tendance vers une relation inverse entre sensibilité et spécificité. la syphilis peut conduire à une transmission ultérieure de la maladie si le patient est sous-diagnostiqué ou comporte un risque de stigmatisation inutile pour le patient s’il est surdiagnostiqué, il peut être avantageux d’utiliser les données numériques du lecteur pour équilibrer la sensibilité et spécificité pour différentes populations en utilisant une valeur seuil spécifique De plus, la mesure par le lecteur automatique est supérieure à la lecture visuelle parce que le premier a le potentiel de surveiller les changements de densité des anticorps non tréponémiques correspondant au titre sur le test non tréponémique pour évaluer une réponse au traitement ou déterminer une nouvelle infection. Cependant, lorsque le lecteur automatique est introduit, une gamme de seuils doit être examinée. Pour déterminer le seuil optimal En outre, les besoins en électricité peuvent constituer un obstacle à l’introduction de ce lecteur automatique dans les pays à ressources limitées. L’étude sur l’utilisation du test POC double pour prévenir les issues défavorables de grossesse en Afrique subsaharienne a montré que le test est rentable car il peut réduire les coûts dans les pays à ressources limitées où la maladie est prévalente et la perte de suivi élevée Pour l’introduction du test de double COP dans les programmes nationaux ou régionaux de lutte contre la syphilis, des études plus opérationnelles sur la faisabilité sociétale , le centre de santé et les perspectives des patients, la traduction dans les politiques et l’évaluation de l’impact et de la rentabilité nécessaire

CONCLUSIONS

Le double test POC évalué dans cette étude montre une bonne sensibilité et spécificité pour déterminer les anticorps tréponémiques et non tréponémiques dans les types d’échantillons prélevés chez des patients dans des cliniques d’infections sexuellement transmissibles et des groupes à haut risque dans des contextes de proximité en Chine. les résultats des tests, il est susceptible d’être utile dans le contrôle de la syphilis dans les établissements de soins de santé primaires et en dehors des paramètres cliniques traditionnels ainsi

Remarques

Remerciements Les auteurs remercient le personnel qui a travaillé sur les sites d’étude pour le recrutement des participants, la collecte des échantillons et la réalisation des tests. Nous remercions également tous les participants de cette étude pour leur coopérationDisclaimer Les sponsors de l’étude n’ont aucun rôle dans la conception des études Collecte de données, analyse de données, interprétation de données ou rédaction du manuscrit Soutien financier Ce travail a été soutenu par le Programme d’introduction rapide au dépistage de la syphilis Programme spécial UNICEF / PNUD / Banque mondiale / OMS de recherche et de formation sur les maladies tropicales. Bill & amp; Melinda Gates Foundation à XS C Les doubles kits POC ont été fournis par Chembio Diagnostics Systems IncPotential conflits d’intérêts Tous les auteurs: Aucun conflit signaléTous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits potentiels Conflits d’intérêts que les éditeurs considèrent pertinents pour le contenu de le manuscrit a été divulgué